固定相是色谱柱内不移动的活性物质称为固定相,是色谱分析中的关键,混合组分的分离,主要取决于固定相的选择。

固定相是色谱柱内不移动的活性物质称为固定相,是色谱分析中的关键,混合组分的分离,主要取决于固定相的选择。吸收色谱所用的固定相通常为具有吸附活性的物质,如硅胶、氧化铝、活性炭等。分配色谱中的固定相是涂渍在载体表面上的液体。在这里,惰性物质(载体)单纯作为固定相的物理支持物,不属于固定相的组成部分。

离子交换色谱中的固定相为离子交换剂,排阻色谱中的固定相为凝胶。

固定相的选择

分离中等极性和极性较强的化合物可选择极性键合相。氰基键合相对双键异构体或含双键数不等的环状化合物的分离有较好的选择性。氨基键合相具有较强的氢键结合能力，对某些多官能团化合物如甾体、强心甙等有较好的分离能力；氨基键合相上的氨基能与糖类分子中的羟基产生选择性相互作用，故被广泛用于糖类的分析，但它不能用于分离羰基化合物，如甾酮、还原糖等，因为它们之间会发生反应生成Schiff 碱。二醇基键合相适用于分离有机酸、甾体和蛋白质。

分离非极性和极性较弱的化合物可选择非极性键合相。利用特殊的反相色谱技术，例如反相离子抑制技术和反相离子对色谱法等，非极性键合相也可用于分离离子型或可离子化的化合物。ODS(octadecyl silane)是应用最为广泛的非极性键合相，它对各种类型的化合物都有很强的适应能力。短链烷基键合相能用于极性化合物的分离，而苯基键合相适用于分离芳香化合物。

另外，美国药典对色谱法规定较严，它规定了柱的长度，色谱填料的种类和粒度，色谱填料分类也较详细，这样使色谱图易于重现；而中国药典仅规定色谱填料种类，未规定柱的长度和粒度，这使检验人员难于重现实验，在某些情况下还浪费时间和试剂。

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